Toshiya Sato團(tuán)隊發(fā)表在《Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol》期刊的該篇文章研究內(nèi)容為：通過烏拉坦麻醉（氨基甲酸乙酯）且交感神經(jīng)切除的 2 型糖尿病大鼠與非糖尿病大鼠探討 2 型糖尿病相關(guān)的腮腺副交感神經(jīng)血管舒張功能受損與唾液分泌減少之間的關(guān)聯(lián)，分析三大主要唾液腺（腮腺、頜下腺、舌下腺）的血流動力學(xué)與唾液分泌的關(guān)系及潛在機制。

摘要

通過激光散斑成像和唾液收集的方法，在烏拉坦麻醉且交感神經(jīng)切除的 2 型糖尿病大鼠與非糖尿病大鼠中，研究了三大主要唾液腺的血流動力學(xué)與唾液分泌之間的關(guān)系。在糖尿病大鼠和非糖尿病大鼠中，舌神經(jīng)刺激均能快速增加腺體血流量，并誘導(dǎo)三大腺體分泌唾液。與非糖尿病大鼠相比，糖尿病大鼠腮腺的血流量增加幅度和唾液分泌量明顯降低；但在頜下腺、舌下腺等其他腺體中未觀察到這種現(xiàn)象。盡管靜脈注射乙酰膽堿能以劑量依賴性方式增加腮腺血流量，但糖尿病大鼠的這種反應(yīng)低于非糖尿病大鼠。同樣，糖尿病大鼠腮腺中 M1 和 M3 毒蕈堿乙酰膽堿受體（mAChR）的 mRNA 表達(dá)水平也相對低于非糖尿病大鼠。我們的研究結(jié)果表明，2 型糖尿病會損害腮腺的副交感神經(jīng)血管舒張功能和唾液分泌功能，并提示膽堿能血管舒張通路的紊亂可能是導(dǎo)致副交感神經(jīng)介導(dǎo)的腺體血管舒張功能受損的潛在機制之一。

實驗材料與儀器

（一）實驗材料

實驗動物

? 2 型糖尿病模型大鼠：8-10 周齡（糖尿病前期）和 45-50 周齡（慢性糖尿病期）的雄性OLETF大鼠，該大鼠因膽囊收縮素（ CCK）-1 受體缺乏導(dǎo)致多食，且受多隱性基因和睪酮調(diào)控誘發(fā) 2 型糖尿病；

? 非糖尿病對照大鼠：同齡雄性LETO大鼠；

實驗藥物

? 麻醉相關(guān)：異氟烷、烏拉坦

? 肌肉松弛劑：泮庫溴銨；

? 神經(jīng)遞質(zhì)及溶劑：乙酰膽堿、無菌生理鹽水；

? 分子生物學(xué)試劑：TRIzol/mRNA 試劑、FastStart Essential DNA Green Master、針對 M1-M5 mAChR 和 β- 肌動蛋白（β-actin）的特異性引物。

（二）實驗儀器

1. 血流測量儀器

Omegawave OZ-2激光散斑血流成像儀：采用 780nm 半導(dǎo)體激光漫射照射腺體，獲取二維血流圖并通過配套 pallet 軟件分析感興趣區(qū)域的血流信號；

Omegawave FLO-C1激光多普勒血流儀：用于監(jiān)測下唇左側(cè)血流變化，所有記錄均進(jìn)行零血流電校準(zhǔn)，血流變化以任意單位（a.u.）表示。

Omegawave FLO-C1激光多普勒血流儀

Omegawave OZ-2激光散斑血流成像儀

大鼠電刺激部位、血流測量部位及唾液收集方法示意圖

A：刺激部位為舌神經(jīng)（LN）的中樞切斷端。

B、C：血流測量部位：B 圖采用激光散斑成像技術(shù)測定腮腺（PG）、下頜下腺（SMG）及舌下腺（SLG）的血流；C 圖采用激光多普勒血流儀（LDF）測定下唇的血流。

D：唾液分泌記錄方法：通過聚乙烯導(dǎo)管經(jīng)沃頓管收集唾液；在口腔內(nèi)放置棉球收集唾液；采用濕度檢測裝置測定黏膜濕度值。

生理參數(shù)監(jiān)測儀器

小電極型血糖分析儀、呼吸機、紅外分析儀、電子刺激器。

唾液與黏膜濕度檢測儀器

濕度檢測儀、聚乙烯管、預(yù)稱重棉球、精密天平。

實驗過程

1. 動物準(zhǔn)備與麻醉管理

2. 體重與血糖測量

實驗前大鼠禁食 15 小時，異氟烷麻醉后稱量體重；尾靜脈取血約 20μL，用 Antsense Duo 血糖分析儀檢測空腹血糖，每個樣本測 2 次取均值。

3. 腺體血流與血管傳導(dǎo)率檢測

大鼠水平臥位，Omegawave FLO-C1激光多普勒血流儀激光照射三大唾液腺，Omegawave OZ-2激光散斑血流成像儀采集散射光生成原始散斑圖像（反映紅細(xì)胞數(shù)量 / 速度）；LDF 監(jiān)測下唇左側(cè)血流。

在糖尿病大鼠（實心圓，每組樣本量 n=6）與非糖尿病大鼠（空心圓，每組樣本量 n=6）的糖尿病前期及糖尿病慢性期，采用Omegawave OZ-2激光散斑血流成像儀測定腺體及下唇的靜息血流 [任意單位（a.u.）]

4. 舌神經(jīng)刺激與乙酰膽堿給藥

5. 唾液分泌與口腔黏膜濕度測量

6. 實時 RT-PCR 檢測 mAChR mRNA 表達(dá)

7. 統(tǒng)計分析

實驗結(jié)論

2 型糖尿病主要損害腮腺的副交感神經(jīng)血管舒張功能和唾液分泌功能，而對頜下腺、舌下腺影響較??；膽堿能血管舒張通路紊亂（尤其是 M1、M3 mAChR 表達(dá)降低）是腮腺副交感神經(jīng)介導(dǎo)的血流增加受損的潛在機制，腺體血流動力學(xué)異常可能參與糖尿病相關(guān)口干癥（xerostomia）的發(fā)生。